Tous à fréquemment, des microscopes sophistiqués et bien équipés ne donnent pas d'excellentes images en raison d'une utilisation incorrecte de la source lumineuse, ce qui conduit généralement à un éclairage d'échantillon inadéquat. Lorsqu'elle est optimisée, l'éclairage de l'échantillon doit être brillant, sans éclat et uniformément dispersé dans le champ de vision.
Il existe de nombreuses sources lumineuses disponibles pour éclairer les microscopes, à la fois pour l'observation de routine et la photomicrographie critique. Une source lumineuse la plus courante, en raison de son faible coût et de sa longue durée de vie, est la lampe halogène en tungstène de 50 ou 100 watts comme illustré à la base du diagramme du microscope de la figure 1, qui détaille également les voies optiques dans un microscope optique moderne transmis moderne. Sur cette figure, la lampe en tungstène-halogène émet un spectre continu de clair centré à 3200 K (lorsqu'il est réglé sur une tension de lampe de +9 volts), qui est ensuite passé à travers un collecteur et un objectif de champ avant d'être réfléchi dans le condensateur de la sous-étape et sur l'échantillon. Les rayons lumineux formant l'image sont capturés par l'objectif du microscope et transmis soit dans les oculaires ou dirigés par un éclipteur de faisceau dans l'un des nombreux ports de la caméra. Tout au long de la voie optique du microscope, l'éclairage est dirigé et concentré à travers une série de diaphragmes et de lentilles lorsqu'il se déplace de la source pour éclairer l'échantillon puis dans les oculaires ou la fixation de la caméra. L'alignement des composants optiques d'un microscope pour optimiser l'éclairage dans les microscopes modernes est réalisé en suivant l'éclairage des règles de Köhler. Plus de détails sur la façon dont les microscopes lumineux transmis et réfléchis sont alignés pour un illumination appropriéköhler discuté dans nos sections sur la mise en place d'un microscope ForTransmettet LightAndrefled Light. Les voies optiques illustrées ci-dessus sur la figure 1 sont typiques pour un microscope optique transmis et impliquent un certain nombre de lentilles, de diaphragmes, de miroirs et de splitters de faisceau pour orienter la lumière à travers le microscope.
Les lampes en tungstène-halogène sont relativement brillantes avec un spectre de couleurs centré à 3200 K (lorsqu'ils sont réglés à environ +9} volts), mais nécessitent des filtres de conversion de couleur pour augmenter leur température de couleur à l'équivalence du jour. Une autre source de lumière populaire est la lampe de xénon de 75 à 150 watts en raison de sa très haute luminosité et de sa longue durée de vie, une sortie relativement uniforme à travers le spectre visuel et une température de couleur qui se rapproche de celle requise par les émulsions de film de jour. Lorsque une intensité lumineuse très élevée est requise, des lampes-halide en étain sont souvent utilisées. Influrescémimicroscopie, notamment à des fins de photomicrographie critique, 100 watts ou 200 watts de brûleurs de mercure sont souvent utilisés. Au cours des années précédentes, des lumières à arc de carbone ou des ampoules en zirconium pourraient avoir été utilisées, mais ces sources sont rarement vues aujourd'hui. Pour plus d'informations et une discussion détaillée du large éventail de lampes disponibles pour l'éclairage du microscope, visitez nos sources de section onlight pour la microscopie et la photomicrographie.
L'alignement de l'éclairage de la source par des voies optiques dans la microscopie optique réfléchie est également une préoccupation principale, en particulier en ce qui concerne la métallographie, l'inspection de la tranche de semi-conducteurs et les nouveaux progrès remarquables réalisés en microscopie à fluorescence. Les microscopes optimistes réfléchis sont également éclairés par une variété de sources lumineuses (comme discuté ci-dessus) et peuvent être ajustées pour des performances optimales en utilisant l'éclairage de Köhler. Ceci est discuté plus en détail dans notre section sur la configuration de l'éclairage de Köhler pour la microscopie optique réfléchie. Les voies d'éclairage pour la microscopie optique réfléchie sont également le sujet de plusieurs didacticiels Java interactifs, y compris celui lié directement ci-dessous.
Dans son excellent livre "Photography Through the Microscope", John Dellyargues entre 80 et 90 pour cent de toutes les photomicrographies soumises à des concours, des expositions et des publications scientifiques sont victimes d'une optique mal alignée, entraînant un mauvais échantillon. Il s'agit de l'un des problèmes les plus courants de microscopie et de photomicrographie en général, et un examen surprise des microscopes étudiants dans de nombreux laboratoires universitaires révélera une abondance de condenseurs et de sources d'éclairage mal ajustés. Nous soupçonnons que l'alignement et l'ajustement incorrects du condenseur et du diaphragme de champ, sur toute la gamme d'objectifs dans un microscope donné, sont la plus grande source d'erreurs de photomicographie.
La nécessité d'un éclairage approprié ne peut pas être surestimée. Trop souvent, un microscope à 25 $, {1}} est réduit au niveau d'une lêteuse à la main par un éclairage et un alignement inappropriés, entraînant des photomicrographies qui sont dépassées par celles prises avec un microscope de 2000 $ dans des conditions optimales d'illumination de Köhler. Dans les sections compagnons de cette introduction traitant de la théorie de l'éclairage de Köhler et de sa mise en œuvre (à la fois ForTransmitedAndreflectedlight), nous discutons
